瓊脂糖核酸電泳實(shí)驗(yàn)操作流程

瓊脂糖核酸電泳實(shí)驗(yàn)操作流程

1.用蒸餾水將制膠模具和梳子沖洗干凈，放在制膠平板上，封閉模具邊緣，架好梳子；

2.根據(jù)欲分離DNA大小用凝膠緩沖液配制適宜濃度的瓊脂糖凝膠：準(zhǔn)確稱量瓊脂糖干粉，加入到配膠用的三角燒瓶?jī)?nèi)，定量加入電泳緩沖液（一般20~30 ml）；

3.放入到微波爐內(nèi)加熱熔化。冷卻片刻，加入一滴熒光染料，輕輕旋轉(zhuǎn)以充分混勻凝膠溶液，倒入電泳槽中，待其凝固；

4.室溫下30~45分鐘后凝膠*凝結(jié)，小心拔出梳子，將凝膠安放在電泳槽內(nèi)；

5.向電泳槽中倒入電泳緩沖液，其量以沒(méi)過(guò)膠面1mm為宜，如樣品孔內(nèi)有氣泡，應(yīng)設(shè)法除去；

6.在DNA樣品中加入10×體積的載樣緩沖液（loading buffer），混勻后，用槍將樣品混合液緩慢加入被浸沒(méi)的凝膠加樣孔內(nèi)；

7.接通電源，紅色為正極，黑色為負(fù)極，切記DNA樣品由負(fù)極往正極泳動(dòng) (靠近加樣孔的一端為負(fù))。一般60～100V電壓，電泳20～40min即可；

8. 根據(jù)指示劑泳動(dòng)的位置，判斷是否終止電泳；

9.電泳完畢，關(guān)上電源，在凝膠成像儀上觀察電泳帶及其位置，并與核酸分子量標(biāo)準(zhǔn)Marker比較被擴(kuò)增產(chǎn)物的大小。 

瓊脂糖凝膠濃度與線形DNA的分辨范圍

瓊脂糖凝膠濃度線形DNA的分辨范圍（bp）

0.5%1,000～30,000

0.7%800～12,000

1.0%500～10,000

1.2%400～7,000

1.5%200～3,000

2.0%50～2,000